ما در هفته گذشته چندین ملاحظات را برای استفاده از الکتروفورز غشای سلولز استات به اشتراک گذاشتیم و امروز این مبحث را برای مرجع شما در اینجا به پایان خواهیم رساند.
انتخاب از غلظت بافر
غلظت بافر مورد استفاده در الکتروفورز غشایی استات سلولز معمولاً کمتر از الکتروفورز کاغذی است. pH رایج 8.6Bبافر آربیتال معمولاً در محدوده 0.05 مول در لیتر تا 0.09 مول در لیتر انتخاب می شود. هنگام انتخاب غلظت، یک تعیین اولیه انجام می شود. به عنوان مثال، اگر طول نوار غشایی بین الکترودها در محفظه الکتروفورز 8-10 سانتی متر باشد، ولتاژ 25 ولت در هر سانتی متر طول غشا لازم است و شدت جریان باید 0.4-0.5 میلی آمپر بر سانتی متر عرض غشا باشد. اگر این مقادیر در طول الکتروفورز به دست نیامد یا از آنها فراتر رفت، غلظت بافر باید افزایش یا رقیق شود.
غلظت بسیار کم بافر منجر به حرکت سریع نوارها و افزایش عرض باند می شود. از سوی دیگر، غلظت بافر بیش از حد بالا، مهاجرت باند را کند می کند و تشخیص باندهای جداسازی خاص را دشوار می کند.
لازم به ذکر است که در الکتروفورز غشایی استات سلولز، بخش قابل توجهی از جریان از طریق نمونه هدایت می شود که مقدار قابل توجهی گرما تولید می کند. گاهی اوقات، غلظت بافر انتخابی ممکن است مناسب در نظر گرفته شود. با این حال، در شرایط افزایش دمای محیط یا هنگام استفاده از ولتاژ بالاتر، تبخیر آب در اثر گرما می‌تواند تشدید شود و در نتیجه غلظت بافر بیش از حد بالا باشد و حتی باعث خشک شدن غشا شود.
حجم نمونه
در الکتروفورز غشا استات سلولز، مقدار حجم نمونه توسط عوامل مختلفی از جمله شرایط الکتروفورز، خواص خود نمونه، روش های رنگ آمیزی و تکنیک های تشخیص تعیین می شود. به عنوان یک اصل کلی، هرچه روش تشخیص حساس تر باشد، حجم نمونه کوچکتر می شود، که برای جداسازی مفید است. اگر حجم نمونه بیش از حد باشد، الگوهای جداسازی الکتروفورتیک ممکن است واضح نباشد و رنگ‌آمیزی نیز می‌تواند زمان‌بر باشد. با این حال، هنگام تجزیه و تحلیل کمی باندهای رنگ‌آمیزی جدا شده با استفاده از روش‌های تشخیص رنگ‌سنجی شستشو، حجم نمونه نباید خیلی کم باشد، زیرا می‌تواند منجر به مقادیر جذب کمتر برای اجزای خاص شود و منجر به خطاهای بالاتر در محاسبه محتوای آنها شود. در چنین مواردی، حجم نمونه باید به طور مناسب افزایش یابد.
به طور معمول، حجم نمونه اضافه شده در هر سانتی متر از خط کاربرد نمونه از 0.1 تا 5 میکرولیتر، معادل مقدار نمونه 5 تا 1000 میکروگرم است. به عنوان مثال، در آنالیز معمول الکتروفورز پروتئین سرم، حجم نمونه اضافه شده در هر سانتی متر از خط کاربرد معمولاً از 1 میکرولیتر، معادل 60 تا 80 میکروگرم پروتئین تجاوز نمی کند. با این حال، هنگام تجزیه و تحلیل لیپوپروتئین ها یا گلیکوپروتئین ها با استفاده از روش الکتروفورز یکسان، حجم نمونه باید به همان نسبت افزایش یابد.
در نتیجه، مناسب ترین حجم نمونه باید بر اساس شرایط خاص از طریق یک سری آزمایش های اولیه انتخاب شود.
انتخاب محلول رنگ آمیزی
نوارهای جدا شده در الکتروفورز غشای استات سلولز معمولاً قبل از تشخیص رنگ آمیزی می شوند. اجزای مختلف نمونه به روش‌های رنگ‌آمیزی متفاوتی نیاز دارند و روش‌های رنگ‌آمیزی مناسب برای الکتروفورز غشایی استات سلولز ممکن است کاملاً برای کاغذ صافی قابل استفاده نباشد.
سه اصل اصلی برای انتخاب محلول لکه دار وجود داردغشای استات سلولز. اولا،رنگهای محلول در آب باید بر رنگهای محلول در الکل ترجیح داده شوند تا از انقباض غشا و تغییر شکل ناشی از محلول رنگ آمیزی دومی جلوگیری شود. پس از رنگ آمیزی، مهم است که غشا را با آب بشویید و مدت زمان لکه گیری را به حداقل برسانید. در غیر این صورت، غشاء ممکن است پیچ خورده یا منقبض شود، که بر تشخیص بعدی تأثیر می گذارد.
ثانیاً ترجیح داده می‌شود که رنگ‌هایی با تمایل رنگ‌آمیزی قوی برای نمونه انتخاب شود. در الکتروفورز غشای سلولز استات پروتئین‌های سرم، آمینو بلک 10B معمولاً به دلیل تمایل رنگ‌آمیزی قوی آن به اجزای مختلف پروتئین سرم و پایداری آن استفاده می‌شود.
ثالثاً، رنگهای با کیفیت قابل اعتماد باید انتخاب شوند. برخی از رنگ‌ها، علی‌رغم داشتن نام مشابه، ممکن است حاوی ناخالصی‌هایی باشند که پس از رنگ‌آمیزی، پس‌زمینه‌ای تیره ایجاد می‌کنند. این حتی می تواند نوارهای اصلی که به خوبی از هم جدا شده اند را تار کند و تشخیص آنها را دشوار کند.
در نهایت، انتخاب غلظت محلول رنگ‌آمیزی مهم است. از نظر تئوری، ممکن است به نظر برسد که غلظت محلول رنگ‌آمیزی بالاتر منجر به رنگ‌آمیزی کامل‌تر اجزای نمونه و نتایج رنگ‌آمیزی بهتر می‌شود. با این حال، این مورد نیست. میل ترکیبی بین اجزای نمونه و رنگ دارای حد مشخصی است که با افزایش غلظت محلول رنگ‌آمیزی افزایش نمی‌یابد. برعکس، غلظت بیش از حد محلول رنگ‌آمیزی نه تنها رنگ را هدر می‌دهد، بلکه دستیابی به پس‌زمینه شفاف را دشوار می‌کند. علاوه بر این، هنگامی که شدت رنگ به حداکثر مقدار معینی می رسد، منحنی جذب رنگ از یک رابطه خطی پیروی نمی کند، به خصوص در اندازه گیری های کمی. در الکتروفورز غشایی استات سلولز، غلظت محلول رنگ آمیزی به طور کلی کمتر از آن است که در الکتروفورز کاغذ استفاده می شود.
جزئیاتی که باید در مورد بیوتکنولوژی بیجینگ لیویی بدانید's غشای استات سلولزمخزن الکتروفورز و کاربرد الکتروفورز آن، لطفا به اینجا مراجعه کنید:
لآزمایش جداسازی پروتئین سرم توسط غشای سلولز استات
لهنگام استفاده از الکتروفورز غشایی سلولز استات باید چندین نکته را در نظر داشت (1)
اگر برنامه ای برای خرید محصولات ما دارید، لطفا با ما تماس بگیرید. می توانید به ایمیل ما پیام ارسال کنید[ایمیل محافظت شده]یا[ایمیل محافظت شده]، یا لطفاً با ما تماس بگیرید +86 15810650221 یا واتساپ +86 15810650221 یا وی چت: 15810650221 را اضافه کنید.
مرجع:الکتروفورز (ویرایش دوم) توسط آقای لی
زمان ارسال: ژوئن-06-2023