آزمایش جداسازی پروتئین سرم با الکتروفورز غشایی سلولز استات

اصل

الکتروفورز فیلم استات سلولز یک روش الکتروفورز با استفاده از فیلم استات سلولز به عنوان تکیه گاه است.پدیده ای که در آن ذرات باردار تحت تأثیر میدان الکتریکی به سمت الکترود مخالف حرکت می کنند، الکتروفورز نامیده می شود.از آنجایی که هر پروتئین نقطه ایزوالکتریک مشخصی دارد، اگر پروتئینی در محلولی با pH کمتر از نقطه ایزوالکتریک آن قرار گیرد، پروتئین بار مثبت پیدا کرده و به سمت الکترود منفی حرکت می کند.برعکس، به سمت قطب مثبت حرکت می کند.از آنجایی که سرعت حرکت مولکول های پروتئین در میدان الکتریکی با بار آنها مرتبط است، شکل و اندازه مولکول ها، پروتئین های مختلف را می توان با الکتروفورز جدا کرد.سرم حاوی پروتئین های مختلفی است که همگی دارای نقاط ایزوالکتریک در pH 7.5 یا کمتر هستند.هنگامی که سرم برای انجام الکتروفورز در بافر PH 8.6 قرار می گیرد، تمام پروتئین های سرم دارای بار منفی هستند و به سمت مثبت در میدان الکتریکی حرکت می کنند.از آنجایی که پروتئین های مختلف سرم دارای بارهای متفاوتی در pH یکسان هستند، ذرات مولکولی از نظر اندازه متفاوت هستند و بنابراین سرعت مهاجرت متفاوت است و با الکتروفورز از هم جدا می شوند.نقاط ایزوالکتریک و وزن مولکولی پروتئین های سرم در جدول زیر نشان داده شده است:

آزمایش جداسازی پروتئین های مختلف در سرم خون با غشای استات سلولز (مخفف CAM) به عنوان محیط حمایتی است.CAM نوعی لوس فوم دار استeفیلم با یکنواخت خوب و ضخامت 0.1mm-1.5mm است که جذب آب خاصی دارد.

مواد، ابزار و معرف های الکتروفورز CAM

نمونه ها:سرم خون انسان سالم

ابزار:منبع تغذیه DYY-6C، مخزن الکتروفورز DYCP-38C، بارگیری نمونه برتر WD-9404

معرف ها

1) غشای استات سلولز 7X9cm

2) محلول بافر باربیتول PH 8.6 (قدرت یونی 0.05-0.09، زمان 0.06: 1.84 گرم دی اتیل باربیتوریک اسید و سپس 1.03 گرم دی اتیل سدیم پنتوباربیتال، مقداری آب مقطر به حرارت اضافه کنید تا حل شود و درست شود. تا 1000 میلی لیتر؛

3) لکه دار کردن: پونسو S 0.2 گرم، تری کلرواستیک 3 گرم، 100 میلی لیتر آب مقطر اضافه کنید.

4) TBS/T یا PBS/T: 45 میلی لیتر اتانول 95 درصد، 5 میلی لیتر اسید استیک یخبندان، 50 میلی لیتر آب مقطر اضافه کنید.

5) محلول تمیز کننده: 70 میلی لیتر اتانول بی آب، 30 میلی لیتر اسید استیک یخبندان.

روش آزمایشd

1) غشا را آماده کنید: غشاء را به مدت 30 دقیقه تا 8 ساعت در محلول بافر باربیتول فرو کنید و آن را خارج کنید و محلول اضافی را با کاغذ جاذب جدا کنید.

2) بارگیری نمونه ها: سمت ناهموار و صاف غشاء را تشخیص دهید و یک خط را در فاصله 1.5 سانتی متری تا انتهای بالایی در سمت ناهموار مشخص کنید.نمونه ها را با ابزار بارگذاری نمونه برتر در سمت ناهموار بارگیری کنید.توجه: نمونه ها باید در سمت ناهموار غشاء بارگذاری شوند.پس از نفوذ کامل نمونه‌های سرم به داخل غشا، غشا را برگردانید، سمت ناهموار (همراه با نمونه‌ها) را به سمت مخزن قرار دهید و انتهای آن با نمونه‌ها در الکترود منفی قرار می‌گیرد.

3) الکتروفورز: منبع تغذیه را روشن کنید، 0.4～غشاء 0.6 متر A/cm، زمان اجرا 30-45 دقیقه است.پس از اجرای الکتروفورز، برق را خاموش کنید.

4) لکه دار کردن و تمیز کردن: غشاء را از مخزن خارج کرده و غوطه ور کنیدit به مدت 5 دقیقه در محلول رنگرزی قرار دهید و سپس آن را بارها و بارها به مدت 3-4 بار در محلول تمیز کننده تمیز کنید تا رنگ زمینه شفاف شود.پروتئین های سرم باید روی نوارها نشان داده شوند و معمولاً پنج ناحیه وجود دارد که از انتهای بالای خط مشخص شده تشکیل می شود، آلبومین، α1-گلولین، α2-گلولین، β-گلولین، γ-گلولین.

5) حفظ: الکتروفورز خشک را قرار دهیدباندبه مدت 10-15 دقیقه در محلول تمیز کننده قرار دهید و سپس آن را بیرون آورده و روی یک لیوان تمیز بچسبانید و بعد از خشک شدن تبدیل به یک فیلم شفاف می شود.باند.

آزمایش کنیدنتیجه

اثر جداسازی نمونه های سرم خوب است و پدیده باطله شدن وجود ندارد.تکرارپذیری نتایج با توجه به روش‌های آزمایش و روش‌های آزمایشگر متفاوت است و تکرارپذیری بالاست.

نتیجه

سیستم تشخیص سریع الکتروفورز بالینی (مخزن الکتروفورزDYCP-38C،منبع تغذیهDYY-6C و بارگیری نمونه برتر WD-9404) تولید شده توسط ماشرکت Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdالزامات تجربی را برآورده می کند،ونتایج قابل تکرار، ساده و سریع، مناسب برایدرس دادنپژوهش.

پکن لیوییشرکت بیوتکنولوژی با مسئولیت محدود در تولید محصولات الکتروفورز برای صنعت علوم زیستی تخصص دارد کهبیش از 50 سال سابقه در چین دارد و این شرکت می تواند محصولات پایدار و باکیفیت را در سراسر جهان ارائه دهد.از طریق سالها توسعه، شایسته انتخاب شماست!

ما اکنون به دنبال شرکای هستیم، هم مخزن الکتروفورز OEM و هم توزیع کنندگان مورد استقبال قرار می گیرند.

برای اطلاعات بیشتر در مورد ما، لطفا از طریق ایمیل با ما تماس بگیرید[ایمیل محافظت شده]یا[ایمیل محافظت شده].