الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید چیست؟

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید

الکتروفورز ژل یک تکنیک اساسی در آزمایشگاه ها در سراسر رشته های بیولوژیکی است که امکان جداسازی ماکرومولکول هایی مانند DNA، RNA و پروتئین ها را فراهم می کند. رسانه‌ها و مکانیسم‌های جداسازی مختلف به زیرمجموعه‌های این مولکول‌ها اجازه می‌دهند تا با بهره‌برداری از ویژگی‌های فیزیکی آن‌ها، به طور مؤثرتری از هم جدا شوند. به طور خاص برای پروتئین ها، الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (PAGE) اغلب روش انتخابی است.

PAGE تکنیکی است که ماکرومولکول هایی مانند پروتئین ها را بر اساس تحرک الکتروفورتیک آنها، یعنی توانایی آنالیت ها برای حرکت به سمت الکترود با بار مخالف، جدا می کند. در PAGE، این با بار، اندازه (وزن مولکولی) و شکل مولکول تعیین می شود. آنالیت ها از طریق منافذ تشکیل شده در ژل پلی آکریل آمید حرکت می کنند. برخلاف DNA و RNA، پروتئین‌ها با توجه به آمینواسیدهای موجود در آن متفاوت هستند، که می‌تواند بر نحوه عملکرد آنها تأثیر بگذارد. رشته های اسید آمینه همچنین ممکن است ساختارهای ثانویه ای را تشکیل دهند که بر اندازه ظاهری آنها و در نتیجه نحوه حرکت آنها در منافذ تأثیر می گذارد. بنابراین ممکن است گاهی اوقات دناتوره کردن پروتئین ها قبل از الکتروفورز برای خطی کردن آنها در صورت نیاز به تخمین دقیق تری از اندازه مطلوب باشد.

صفحه SDS

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید سدیم دودسیل سولفات تکنیکی است که برای جداسازی مولکول های پروتئینی با جرم 5 تا 250 کیلو دالتون استفاده می شود. پروتئین ها تنها بر اساس وزن مولکولی آنها جدا می شوند. سدیم دودسیل سولفات، یک سورفکتانت آنیونی، در تهیه ژل‌ها اضافه می‌شود که بارهای ذاتی نمونه‌های پروتئین را می‌پوشاند و نسبت بار به جرم مشابهی به آن‌ها می‌دهد. به عبارت ساده، پروتئین ها را دناتوره می کند و به آنها بار منفی می دهد.

PAGE بومی

Native PAGE تکنیکی است که از ژل های غیردناتوره شده برای جداسازی پروتئین ها استفاده می کند. برخلاف SDS PAGE، هیچ عامل دناتوره کننده در تهیه ژل اضافه نمی شود. در نتیجه جداسازی پروتئین ها بر اساس بار و اندازه پروتئین ها صورت می گیرد. در این تکنیک، ترکیب، چین خوردگی و زنجیره اسید آمینه پروتئین ها عواملی هستند که جداسازی به آنها وابسته است. پروتئین ها در این فرآیند آسیب نمی بینند و پس از اتمام جداسازی قابل بازیابی هستند.

الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (PAGE) چگونه کار می کند؟

اصل اساسی PAGE جداسازی آنالیت ها با عبور دادن آنها از منافذ ژل پلی آکریل آمید با استفاده از جریان الکتریکی است. برای رسیدن به این هدف، یک مخلوط آکریل آمید-بیساکریل آمید (پلی آکریل آمید) با افزودن پرسولفات آمونیوم (APS) پلیمریزه می شود. این واکنش که توسط تترا متیل اتیلن دی آمین (TEMED) کاتالیز می شود، ساختار شبکه ای با منافذ تشکیل می دهد که آنالیت ها می توانند از طریق آن حرکت کنند (شکل 2). هر چه درصد آکریل آمید کل موجود در ژل بیشتر باشد، اندازه منافذ کوچکتر است، بنابراین پروتئین هایی که می توانند از آن عبور کنند کوچکتر است. نسبت آکریل آمید به بیساکریل آمید نیز بر اندازه منافذ تأثیر می گذارد، اما این اغلب ثابت نگه داشته می شود. اندازه‌های کوچک‌تر منافذ همچنین سرعت حرکت پروتئین‌های کوچک در ژل را کاهش می‌دهند و وضوح آن‌ها را بهبود می‌بخشند و مانع از ریختن سریع آن‌ها به بافر در هنگام اعمال جریان می‌شوند.

تجهیزات الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید

سلول الکتروفورز ژل (مخزن/ محفظه)
مخزن ژل الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (PAGE) با مخزن ژل آگارز متفاوت است. مخزن ژل آگارز افقی است، در حالی که مخزن PAGE عمودی است. توسط سلول الکتروفورز عمودی (مخزن/محفظه)، یک ژل نازک (معمولاً 1.0 میلی متر یا 1.5 میلی متر) بین دو صفحه شیشه ای ریخته می شود و به گونه ای نصب می شود که پایین ژل در بافر در یک محفظه غوطه ور شود و قسمت بالایی در بافر غوطه ور شود. در اتاقی دیگر هنگامی که جریان اعمال می شود، مقدار کمی از بافر از طریق ژل از محفظه بالایی به محفظه پایینی منتقل می شود. با گیره های قوی برای تضمین ماندن مجموعه در وضعیت عمودی، این تجهیزات اجرای سریع ژل را با خنک شدن یکنواخت و در نتیجه نوارهای متمایز تسهیل می کند.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) طیف وسیعی از سلول های الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید (مخازن/محفظه) را تولید می کند. مدل‌های DYCZ-20C و DYCZ-20G سلول‌های الکتروفورز عمودی (مخزن‌ها/ محفظه‌ها) برای آنالیز توالی‌یابی DNA هستند. برخی از سلول های الکتروفورز عمودی (مخازن/ محفظه ها) با سیستم بلات سازگار هستند، مانند مدل های DYCZ-24DN، DYCZ-25D و DYCZ-25E با سیستم های وسترن بلات مدل DYCZ-40D، DYCZ-40G و DYCZ-40F سازگار هستند. که برای انتقال مولکول پروتئین از ژل به غشاء استفاده می شود. پس از الکتروفورز SDS-PAGE، وسترن بلاتینگ تکنیکی برای تشخیص پروتئین خاص در مخلوط پروتئین است. شما می توانید این سیستم های بلات را با توجه به نیازهای آزمایشی انتخاب کنید.

منبع تغذیه الکتروفورز
برای تامین برق برای اجرای ژل، به منبع تغذیه الکتروفورز نیاز دارید. در Liuyi Biotechnology ما طیف وسیعی از منابع تغذیه الکتروفورز را برای همه کاربردها ارائه می دهیم. مدل DYY-12 و DYY-12C با ولتاژ و جریان پایدار بالا می تواند الکتروفورز مورد نیاز ولتاژ بالا را برآورده کند. عملکرد ایستاده، زمان بندی، VH و کاربرد گام به گام را دارد. آنها برای کاربرد الکتروفورز توالی یابی DNA و IEF ایده آل هستند. برای کاربرد عمومی الکتروفورز پروتئین و DNA، مدل DYY-2C، DYY-6C، DYY-10 و غیره را داریم که منبع تغذیه گرم فروش با سلول های الکتروفورز (مخزن/محفظه) نیز هستند. اینها را می توان برای کاربردهای الکتروفورز ولتاژ متوسط ​​و کم، مانند استفاده از آزمایشگاه مدرسه، آزمایشگاه بیمارستان و غیره استفاده کرد. مدل های بیشتر برای منبع تغذیه، لطفا از وب سایت ما دیدن کنید.

برند Liuyi بیش از 50 سال سابقه در چین دارد و این شرکت می تواند محصولات پایدار و باکیفیت را در سراسر جهان ارائه دهد. از طریق توسعه سالها، شایسته انتخاب شماست!

برای اطلاعات بیشتر در مورد ما، لطفا از طریق ایمیل با ما تماس بگیرید[ایمیل محافظت شده] or [ایمیل محافظت شده].

منابع برای الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید چیست؟
1. کارن استوارد دکترا الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید، نحوه کار، انواع تکنیک و کاربردهای آن