بهینه سازی الکتروفورز ژل: بهترین روش ها برای حجم نمونه، ولتاژ و زمان بندی

مقدمه

الکتروفورز ژل یک تکنیک اساسی در زیست شناسی مولکولی است که به طور گسترده برای جداسازی پروتئین ها، اسیدهای نوکلئیک و سایر ماکرومولکول ها استفاده می شود. کنترل مناسب حجم نمونه، ولتاژ و زمان الکتروفورز برای دستیابی به نتایج دقیق و قابل تکرار بسیار مهم است.همکار آزمایشگاه ما پیشنهاد می دهدبهترین روش ها برای مدیریت این پارامترها در طول الکتروفورز ژل SDS-PAGE.

محصولات الکتروفورز ژل بیوتکنولوژی Beijing Liuyi

حجم نمونه: اطمینان از سازگاری

هنگام انجام الکتروفورز SDS-PAGE، حجم نمونه یک عامل کلیدی است که می تواند به طور قابل توجهی بر وضوح نتایج شما تأثیر بگذارد. به طور کلی توصیه می شود که 10 میکرولیتر پروتئین کل در هر چاه بارگیری شود. برای اطمینان از ثبات و جلوگیری از انتشار نمونه بین چاه های مجاور، مهم است که حجم برابر بافر بارگذاری 1 برابر در هر چاه خالی بارگذاری شود. این اقدام احتیاطی به جلوگیری از پخش شدن نمونه ها به خطوط مجاور کمک می کند، که در صورت خالی ماندن چاه ممکن است رخ دهد.

قبل از بارگیری نمونه های خود، همیشه با اضافه کردن یک نشانگر وزن مولکولی به یک چاه شروع کنید. این امکان شناسایی آسان اندازه پروتئین را پس از الکتروفورز فراهم می کند.

کنترل ولتاژ: تعادل سرعت و وضوح

ولتاژ اعمال شده در طول الکتروفورز مستقیماً بر سرعت مهاجرت نمونه ها از طریق ژل و وضوح جداسازی تأثیر می گذارد. برای SDS-PAGE، توصیه می شود با ولتاژ پایین حدود 80 ولت شروع کنید. این ولتاژ پایین اولیه به نمونه ها اجازه می دهد تا به آرامی و به طور یکنواخت مهاجرت کنند و آنها را در یک نوار تیز هنگام ورود به ژل جداکننده متمرکز کند.

هنگامی که نمونه ها به طور کامل وارد ژل جداکننده شدند، می توان ولتاژ را تا 120 ولت افزایش داد. این ولتاژ بالاتر مهاجرت را تسریع می‌کند و اطمینان حاصل می‌کند که پروتئین‌ها به طور موثر بر اساس وزن مولکولی خود جدا می‌شوند. نظارت بر پیشرفت رنگ آبی بروموفنل، که نشان دهنده تکمیل الکتروفورز است، ضروری است. برای ژل هایی با غلظت 10-12٪، معمولاً 80-90 دقیقه کافی است. با این حال، برای ژل های 15٪، ممکن است لازم باشد زمان اجرا را کمی افزایش دهید.

مدیریت زمان: دانستن زمان توقف

زمان بندی یکی دیگر از عوامل مهم در الکتروفورز ژل است. استفاده از ژل برای مدت طولانی یا خیلی کوتاه می تواند منجر به جدایی نابهینه شود. مهاجرت رنگ آبی بروموفنول یک شاخص مفید است: زمانی که به انتهای ژل می رسد، معمولاً زمان متوقف کردن دویدن است. برای ژل های استاندارد، مانند 10-12٪، مدت زمان الکتروفورز حدود 80-90 دقیقه معمولاً کافی است. برای ژل های با درصد بالاتر، مانند 15٪، زمان اجرا باید افزایش یابد تا از جداسازی کامل پروتئین ها اطمینان حاصل شود.

مدیریت بافر: استفاده مجدد و آماده سازی بافرها

بسته به شرایط خاص آزمایشگاه شما، بافر الکتروفورز را می توان 1-2 بار استفاده مجدد کرد. با این حال، برای نتایج بهینه، توصیه می شود که بافر 10 برابر تازه را تهیه کنید و آن را درست قبل از استفاده رقیق کنید. این تضمین می کند که بافر اثربخشی خود را حفظ می کند و منجر به نتایج الکتروفورز مطمئن تر می شود.

محصولات الکتروفورز ژل بیوتکنولوژی Beijing Liuyi

با کنترل دقیق حجم نمونه، ولتاژ و زمان الکتروفورز، می توانید دقت و تکرارپذیری نتایج الکتروفورز ژل خود را به میزان قابل توجهی بهبود بخشید. پیاده‌سازی این بهترین شیوه‌ها در کار آزمایشگاهی به شما کمک می‌کند تا باندهای واضح‌تر و متمایزتر را به دست آورید، که منجر به داده‌های بهتر برای تجزیه و تحلیل پایین‌دستی می‌شود.

اگر روش‌های خوب بیشتری برای بهینه‌سازی آزمایش الکتروفورز ژل دارید، خوش آمدید با ما صحبت کنید!

Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) بیش از 50 سال است که با تیم فنی حرفه ای خود و مرکز تحقیق و توسعه در ساخت ابزارهای الکتروفورز تخصص دارد. ما خط تولید قابل اعتماد و کامل از طراحی تا بازرسی و انبار و همچنین پشتیبانی بازاریابی داریم. محصولات اصلی ما سلول الکتروفورز (مخزن/محفظه)، منبع تغذیه الکتروفورز، ترانزیل کننده LED آبی، ترانسیلومیاتور UV، ژل تصویر و سیستم آنالیز و غیره است. ما همچنین ابزار آزمایشگاهی مانند ابزار PCR، میکسر ورتکس و سانتریفیوژ را برای آزمایشگاه عرضه می کنیم.

اگر برنامه ای برای خرید محصولات ما دارید، لطفا با ما تماس بگیرید. می توانید به ایمیل ما پیام ارسال کنید[ایمیل محافظت شده]یا[ایمیل محافظت شده]، یا لطفاً با ما تماس بگیرید +86 15810650221 یا واتساپ +86 15810650221 یا وی چت: 15810650221 را اضافه کنید.

لطفاً کد QR را اسکن کنید تا در Whatsapp یا WeChat اضافه کنید.