روش Comet Assay (الکتروفورزیس ژل تک سلولی، SCGE) یک تکنیک حساس و سریع است که در درجه اول برای تشخیص آسیب DNA و ترمیم در سلول های فردی استفاده می شود. نام «آزمایش دنباله‌دار» از شکل مشخصه‌ای شبیه دنباله‌دار گرفته شده است که در نتایج ظاهر می‌شود: هسته سلول «سر» را تشکیل می‌دهد، در حالی که قطعات DNA آسیب‌دیده مهاجرت می‌کنند و یک «دم» شبیه دنباله‌دار ایجاد می‌کنند.
اصل
اصل سنجش دنباله دار مبتنی بر مهاجرت قطعات DNA در یک میدان الکتریکی است. DNA دست نخورده در هسته سلول باقی می ماند، در حالی که DNA آسیب دیده یا تکه تکه شده به سمت آند مهاجرت می کند و "دم" دنباله دار را تشکیل می دهد. طول و شدت دم با میزان آسیب DNA نسبت مستقیم دارد.
رویه
- آماده سازی سلول: سلول های مورد آزمایش با آگارز با نقطه ذوب پایین مخلوط می شوند و روی لام های میکروسکوپ پخش می شوند تا یک لایه یکنواخت تشکیل دهند.
- لیز سلولی: اسلایدها در محلول لیز غوطه ور می شوند تا غشای سلولی و غشای هسته ای جدا شوند و DNA در معرض دید قرار گیرد.
- الکتروفورز: اسلایدها در یک محفظه الکتروفورز تحت شرایط قلیایی یا خنثی قرار می گیرند. قطعات DNA آسیب دیده تحت تأثیر میدان الکتریکی به سمت الکترود مثبت مهاجرت می کنند.
- رنگ آمیزی: پس از الکتروفورز، اسلایدها با یک رنگ فلورسنت (مثلاً اتیدیوم بروماید) رنگ آمیزی می شوند تا DNA را مشاهده کنید.
- تجزیه و تحلیل میکروسکوپی: با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس یا نرم افزار تخصصی، شکل دنباله دار مورد تجزیه و تحلیل قرار می گیرد و پارامترهایی مانند طول و شدت دم اندازه گیری می شود.
تصویر از biorender
تجزیه و تحلیل داده ها
نتایج حاصل از سنجش دنباله دار بر اساس چندین پارامتر کلیدی ارزیابی می شود:
- طول دم: نشان دهنده مسافتی است که DNA مهاجرت می کند و میزان آسیب DNA را نشان می دهد.
- محتوای DNA دم: درصدی از DNA که به دم مهاجرت می کند، که اغلب به عنوان معیار کمی آسیب DNA استفاده می شود.
- لحظه دم زیتون (OTM): طول دم و محتوای DNA دم را ترکیب می کند تا اندازه گیری جامع تری از آسیب DNA ارائه دهد.
برنامه های کاربردی
- مطالعات سمیت ژنتیکی: سنجش دنباله دار به طور گسترده ای برای ارزیابی اثرات مواد شیمیایی، داروها و تشعشعات بر روی DNA سلول استفاده می شود و آن را به ابزاری کلیدی برای آزمایش سمیت ژنی تبدیل می کند.
- سم شناسی محیطی: به تجزیه و تحلیل تاثیر آلاینده های محیطی بر روی DNA موجودات کمک می کند و بینشی در مورد ایمنی اکوسیستم ارائه می دهد.
- تحقیقات پزشکی و بالینی: سنجش دنباله دار در مطالعه مکانیسم های ترمیم DNA، سرطان و سایر بیماری های مرتبط با DNA استفاده می شود. همچنین تاثیر درمان های سرطان مانند پرتودرمانی و شیمی درمانی را بر روی DNA ارزیابی می کند.
- علوم غذایی و کشاورزی: برای ارزیابی ایمنی آفت کش ها، افزودنی های غذایی و سایر مواد و بررسی اثرات سمی آنها در مدل های حیوانی استفاده می شود.
مزایا
- حساسیت بالا: قادر به تشخیص سطوح پایین آسیب DNA است.
- عملیات ساده: این تکنیک ساده است و آن را برای غربالگری با کارایی بالا مناسب می کند.
- برنامه گسترده: می توان آن را برای انواع مختلف سلول از جمله سلول های حیوانی و گیاهی استفاده کرد.
- چالش های کمی سازی: در حالی که داده های کیفی در مورد آسیب DNA ارائه می شود، تجزیه و تحلیل کمی به شدت به نرم افزار و تکنیک های تجزیه و تحلیل تصویر متکی است.
- شرایط آزمایشینتایج را می توان تحت تأثیر عواملی مانند زمان الکتروفورز و pH قرار داد که نیاز به کنترل دقیق شرایط آزمایشگاهی دارد.
محدودیت ها
روش Comet Assay به دلیل انعطاف پذیری و حساسیت بالا در تشخیص آسیب و ترمیم DNA، ابزاری ارزشمند در تحقیقات زیست پزشکی، علوم محیطی و توسعه دارو است. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)محفظه الکتروفورز افقی را برای سنجش دنباله دار ارائه می دهد. خوش آمدید به تماس با ما برای بحث در موردسنجش دنباله دارپروتکل
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) بیش از 50 سال است که با تیم فنی حرفه ای خود و مرکز تحقیق و توسعه در ساخت ابزارهای الکتروفورز تخصص دارد. ما خط تولید قابل اعتماد و کامل از طراحی تا بازرسی و انبار و همچنین پشتیبانی بازاریابی داریم. محصولات اصلی ما سلول الکتروفورز (مخزن/محفظه)، منبع تغذیه الکتروفورز، ترانزیل کننده LED آبی، ترانسیلومیاتور UV، ژل تصویر و سیستم آنالیز و غیره است. ما همچنین ابزار آزمایشگاهی مانند ابزار PCR، میکسر ورتکس و سانتریفیوژ را برای آزمایشگاه عرضه می کنیم.
اگر برنامه ای برای خرید محصولات ما دارید، لطفا با ما تماس بگیرید. می توانید به ایمیل ما پیام ارسال کنید[ایمیل محافظت شده]یا[ایمیل محافظت شده]، یا لطفاً با ما تماس بگیرید +86 15810650221 یا واتساپ +86 15810650221 یا وی چت: 15810650221 را اضافه کنید.
لطفاً کد QR را اسکن کنید تا در Whatsapp یا WeChat اضافه کنید.
زمان ارسال: سپتامبر 20-2024