1. طبقه بندی
الکتروفورز ژل به انواع عمودی (شامل ژل ستونی و ژل دال) و انواع افقی (عمدتا ژل های دال) تقسیم می شود (شکل 6-18). به طور کلی، جداسازی عمودی کمی برتر از افقی است، اما آماده سازی ژل افقی حداقل چهار مزیت دارد: پشتیبانی در زیر کل ژل وجود دارد که امکان استفاده از آگارز با غلظت کم را فراهم می کند. امکان تهیه صفحات ژل آگارز با مشخصات مختلف وجود دارد. آماده سازی ژل و بارگیری نمونه راحت تر است. ساخت محفظه الکتروفورز آسان و مقرون به صرفه است. از آنجایی که الکتروفورز افقی در حالی انجام می شود که صفحه ژل آگارز کاملاً در عمق 1 میلی متری زیر سطح بافر الکتروفورز غوطه ور شده باشد، به آن الکتروفورز غوطه ور نیز می گویند.
مخزن الکتروفورز DYCP-31DN برای الکتروفورز ژل آگارز
2. سیستم بافر
در جداسازی اسید نوکلئیک، اکثر سیستم ها سیستم های پیوسته را اتخاذ می کنند. بافرهای الکتروفورز معمولی شامل TBE (0.08mol/L Tris·HCl، pH 8.5، 0.08mol/L اسید بوریک، 0.0024mol/L EDTA) و THE (0.04mol/L Tris·HCl، pH 7.8، 0.02ml می باشد. سدیم استات، بافر 0.0018mol/L EDTA). این بافرها عموماً به صورت محلول های 10 برابری تهیه می شوند و در هنگام استفاده تا غلظت مورد نیاز رقیق می شوند. نرخ مهاجرت DNA خطی و دایره ای در ژل آگارز با بافر مورد استفاده متفاوت است. در بافر THE، سرعت مهاجرت DNA خطی بیشتر از DNA دایره ای است، در حالی که در بافر TBE، برعکس است.
3.تهیه ژل آگارز
(1) تهیه ژل آگارز افقی
(الف) غلظت مورد نیاز ژل آگارز را با استفاده از بافر الکتروفورز 1 برابر تهیه کنید.
(ب) آگارز را تا انحلال کامل یا در حمام آب جوش، روی همزن مغناطیسی یا در مایکروویو حرارت دهید. محلول آگارز را تا دمای 55 درجه سانتیگراد سرد کنید و رنگ اتیدیوم بروماید (EB) را تا غلظت نهایی 0.5 میکروگرم بر میلی لیتر اضافه کنید.
(ج) لبه های صفحات شیشه ای یا اکریلیک را با مقدار کمی ژل آگارز ببندید، یک شانه اضافه کنید و دندانه های شانه را حدود 0.5 تا 1.0 میلی متر بالای صفحه قرار دهید.
(د) محلول ژل آگارز ذوب شده را به طور مداوم در قالب شیشه ای یا صفحه اکریلیک بریزید (ضخامت به حجم نمونه DNA بستگی دارد) و از وارد شدن حباب های هوا اجتناب کنید. بگذارید به طور طبیعی در دمای اتاق جامد شود.
(ه) بعد از انجماد کامل شانه را با دقت خارج کنید. مقدار مناسبی از بافر الکتروفورز را به مخزن ژل اضافه کنید و اطمینان حاصل کنید که صفحه ژل حدود 1 میلی متر زیر سطح بافر الکتروفورز فرو رفته است.
(2) تهیه ژل آگارز عمودی
(الف) با شستشو با اتانول، چربی یا باقی مانده را از صفحات شیشه ای پاک کنید.
(ب) صفحات اسپیسر را بین سدهای جلو و عقب قرار دهید، لبه های صفحات جداکننده را با سدهای جلو و عقب تراز کنید و آنها را با گیره محکم کنید.
(ج) آگارز 2% را در بافر 1 برابری بین لبه‌های صفحات جداکننده اضافه کنید تا یک پلاگ آگارز به ارتفاع 1 سانتی‌متر در پایین محفظه ریخته‌گری ژل تشکیل شود.
(د) ژل آگارز ذوب شده را با غلظت دلخواه که در 1 برابر بافر تهیه شده است، داخل محفظه ژل تا 1 سانتی متر زیر بالا بریزید.
(ه) شانه را وارد کنید، از گیر افتادن حباب های هوا در زیر دندانه های شانه خودداری کنید. گاهی اوقات، ممکن است در هنگام خنک شدن ژل آگارز، چین و چروک روی دندان های شانه ظاهر شود. در چنین مواردی، به سادگی مقداری آگارز ذوب شده را در بالا اضافه کنید تا جامد شود.
(و) شانه را بردارید. برای جلوگیری از نشت بافر در شیار بارگیری، اتصال بین صفحه ژل آگارز و محفظه الکتروفورز را با آگارز 2% ببندید و به مقدار لازم بافر اضافه کنید.
(ز) 1 برابر بافر الکتروفورز را به محفظه ژل اضافه کنید.
(h) نمونه های DNA را با دقت روی ژل آگارز در زیر بافر قرار دهید.
اطلاعات بیشتر در مورد دانش اولیه در مورد الکتروفورز ژل آگارز، هفته آینده به اشتراک خواهیم گذاشت. ای کاش این اطلاعات برای آزمایش شما مفید باشد.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) بیش از 50 سال است که با تیم فنی حرفه ای خود و مرکز تحقیق و توسعه در ساخت ابزارهای الکتروفورز تخصص دارد. ما خط تولید قابل اعتماد و کامل از طراحی تا بازرسی و انبار و همچنین پشتیبانی بازاریابی داریم. محصولات اصلی ما سلول الکتروفورزیس (مخزن/محفظه)، منبع تغذیه الکتروفورز، ترانسیلومیاتور LED آبی، ترانسیلوماتور UV، سیستم تصویر و تحلیل ژل و غیره است.
ما اکنون به دنبال شرکای هستیم، هم مخزن الکتروفورز OEM و هم توزیع کنندگان مورد استقبال قرار می گیرند.
اگر برنامه ای برای خرید محصولات ما دارید، لطفا با ما تماس بگیرید. می توانید به ایمیل ما پیام ارسال کنید[ایمیل محافظت شده]یا[ایمیل محافظت شده]، یا لطفاً با ما تماس بگیرید +86 15810650221 یا واتساپ +86 15810650221 یا وی چت: 15810650221 را اضافه کنید.
لطفاً کد QR را اسکن کنید تا در Whatsapp یا WeChat اضافه کنید.
زمان ارسال: دسامبر-07-2023